Thermo Scientific T4 DNA 連接酶催化雙螺旋 DNA 或 RNA 中并排的 5-磷酸基和 3-羥基端之間磷酸二酯鍵的形成。該酶可以修復(fù)雙螺旋 DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜合體中的單鏈缺口。其還可以將 DNA 片段與黏性末端或平末端結(jié)合，但對單鏈核酸無活性。

T4 DNA 連接酶需要 ATP 作為輔因子。

產(chǎn)品優(yōu)勢

• 在 Themo Scientific 限制性內(nèi)切酶、PCR 和 RT 緩沖液（補(bǔ)充 ATP 時）中均有活性
• 快速—在室溫下于 10 分鐘內(nèi)完成黏性末端連接
• 隨 PEG 溶液提供，用于高效平末端連接

應(yīng)用

• 克隆限制性內(nèi)切酶生成的 DNA 片段
•克隆 PCR 產(chǎn)物
• 將雙鏈寡核苷酸連接子或接頭與 DNA 相連
• 定點(diǎn)突變
• 擴(kuò)增片段長度多態(tài)性 (AFLP)
• 連接酶介導(dǎo)的 RNA 檢測（參見參考 3）
• 雙螺旋 DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜交體中的缺口修復(fù)
• 線性 DNA 的自環(huán)化。

包括

• T4 DNA 連接酶
• 10X T4 DNA 連接酶緩沖液
• 50% PEG 溶液

備注

• T4 DNA 連接酶與 DNA 的結(jié)合可能導(dǎo)致瓊脂糖凝膠中發(fā)生條帶位移。為避免發(fā)生這種情況，可使用 6X DNA 上樣染料 & SDS 溶液在 70°C 下孵育樣品 5 分鐘或在 65°C 下孵育 10 分鐘，在冰上冷卻后進(jìn)行電泳。
•在轉(zhuǎn)化過程中，連接反應(yīng)混合物的體積不得超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 10%。
•在電轉(zhuǎn)化之前，使用離心柱或氯仿提取去除連接混合物中的 T4 DNA 連接酶。提取得到的 DNA 可以使用乙醇進(jìn)一步沉淀。